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　　小鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠α-GST水平。預(yù)包被抗體的微孔板捕獲樣本中的α-GST，加入生物素標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物，再通過(guò)SABC-辣根過(guò)氧化物酶系統(tǒng)顯色。顯色強(qiáng)度與α-GST濃度成正比，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

　　二、試劑盒組成

　　組分48T規(guī)格96T規(guī)格保存條件

　　預(yù)包被酶標(biāo)板8×6條8×12條2-8℃密封

　　標(biāo)準(zhǔn)品6管(0-24 U/L)6管(0-24 U/L)2-8℃

　　生物素化檢測(cè)抗體60μL(100×)120μL(100×)-20℃

　　TMB顯色液各3mL(A/B液)各6mL(A/B液)避光

　　終止液6mL12mL室溫

　　20×濃縮洗滌液30mL60mL室溫

　　三、實(shí)驗(yàn)步驟

　　樣本處理

　　血清/血漿：采集后離心(3000rpm, 10min)，避免溶血，2-8℃保存48小時(shí)或-80℃長(zhǎng)期保存。

　　組織勻漿：按0.1g組織加1mL PBS比例冰浴勻漿，離心取上清，稀釋50倍后檢測(cè)。

　　檢測(cè)流程

　　加樣：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌：棄液后拍干，每孔加洗滌液200μL，重復(fù)3次。

　　顯色：加入100μL酶標(biāo)抗體，37℃孵育30分鐘，加TMB底物避光反應(yīng)15分鐘。

　　終止：每孔加50μL終止液，30分鐘內(nèi)測(cè)定OD值。

　　四、數(shù)據(jù)分析

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(U/L)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)擬合四參數(shù)曲線。

　　樣本計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算α-GST濃度，組織樣本需乘以稀釋倍數(shù)(如50倍)。

　　五、注意事項(xiàng)

　　樣本要求：避免反復(fù)凍融，高脂樣本需離心去除懸浮物。

　　溫度控制：反應(yīng)全程保持37℃，顯色避光防淬滅。

　　安全操作：TMB底物具腐蝕性，需佩戴手套操作。

　　數(shù)據(jù)驗(yàn)證：建議設(shè)置復(fù)孔，OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)需稀釋重測(cè)。

　　注意：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。

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